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如何正確處理植物組織樣本
發(fā)布時(shí)間： 2018-06-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 2315次一、勻漿介質(zhì)
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶(hù)可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊（0.2g～0.5g）zui少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱(chēng)重，放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g)：體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式：手工勻漿，機(jī)器勻漿。
①手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，制成20%的勻漿液。
②機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī)10000～15000轉(zhuǎn)/分上下研磨制成20%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次，在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長(zhǎng)勻漿時(shí)間）。
鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片（直接涂片、染色均可以），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎，若沒(méi)有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
4、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。
三、樣本保存
植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如*凍融，-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,總蛋白測(cè)定可存5～7天等)