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發(fā)布時(shí)間： 2016-10-28 點(diǎn)擊次數(shù)： 1268次ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、活絡(luò)度高、特異性強(qiáng)的諸多長(zhǎng)處，在試驗(yàn)室的運(yùn)用現(xiàn)已相當(dāng)遍及，絕大多數(shù)是用于檢查不知道樣本中抗原的濃度。如今市面上的ELISA試劑盒既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁復(fù)令人眼花繚亂，并且質(zhì)量也是良莠不齊，那么咱們?cè)鯓硬拍苓x出zui適用的產(chǎn)品呢？首要要依據(jù)咱們所要檢查的分子進(jìn)行檢查，除此以外也還有一些需求加以考量的要素，下面就為咱們供給幾點(diǎn)參閱。
1. 試驗(yàn)類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過(guò)它們都有一個(gè)一起特點(diǎn)，即是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲方法包含將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑駁ELISPOT是兩種格外的類型，In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢查。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細(xì)胞，ELISA試劑盒然后在膜上檢查細(xì)胞排泄的抗原構(gòu)成斑駁。此外，咱們還需求依據(jù)本身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。
一般大家運(yùn)用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢查抗體之間，這種辦法既活絡(luò)又有用，受到了很多研究者的喜愛(ài)。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是挑選，例如有時(shí)候抗原格外小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或許抗體只要一個(gè)抗體位點(diǎn)。在上述情況下，競(jìng)賽性ELISA就更為適用，這種辦法是選用帶符號(hào)的純化抗原與樣本中無(wú)符號(hào)的抗原進(jìn)行競(jìng)賽，以捕獲抗體。
2. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者作用非常好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢查有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢查具有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢查抗體（不管多抗仍是單抗）的配對(duì)很有考究。咱們不希望捕獲抗體與檢查抗體競(jìng)賽抗原上的同一位點(diǎn)，為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢查抗體所識(shí)其他抗原表位不存在堆疊。假如捕獲抗體和檢查抗體之間發(fā)生了抵觸，就會(huì)對(duì)試驗(yàn)成果發(fā)生較大影響。要防止這一疑問(wèn)，咱們能夠挑選采購(gòu)“matched pair"的捕獲/檢查抗體對(duì)，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才引薦的好組合。
3. 穿插反響
假如抗體間發(fā)生抵觸或穿插反響就會(huì)影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來(lái)歷所帶來(lái)的兼容性即是穿插反響的一個(gè)要素。雖然如今采購(gòu)源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越簡(jiǎn)單，咱們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是不是會(huì)發(fā)生穿插反響的疑問(wèn)。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢查時(shí)，檢查用的二抗有必要特異性對(duì)于檢查一抗，而不能與捕獲抗體起反響。假如檢查用二抗與捕獲抗體，試驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢查一抗，來(lái)防止上述疑問(wèn)。
與此同時(shí)，了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免這些buffer富含也許影響抗原抗體相互作用的組分，使檢查成果收到影響。
4. 檢查方法
如今檢查ELISA有很多路徑，咱們能夠依據(jù)自個(gè)的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢查的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過(guò)氧化物酶HRP），而反響系統(tǒng)中增加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠經(jīng)過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢查，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠在一抗上，也能夠在二抗上，還能夠運(yùn)用鏈霉親和素符號(hào)的酶與親和素符號(hào)的一抗。此外ELISA的成果檢查還包含放射性檢查、熒光檢查、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢查等。
ELISA試劑盒上述四點(diǎn)包括的疑問(wèn)就現(xiàn)已很多了，假如您對(duì)考慮采購(gòu)的ELISA試劑盒還有任何疑問(wèn)，都能夠直接向商家咨詢。各大商家的上也有相應(yīng)的技術(shù)資料供給，能夠從中獲取有價(jià)值的產(chǎn)品信息。