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ELISA檢測試劑盒的準(zhǔn)確操作步驟
發(fā)布時間： 2015-01-19 點(diǎn)擊次數(shù)： 1637次面對市場上種類越來越多的ELISA檢測試劑盒，人elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、豬elisa試劑盒、羊elisa試劑盒等，再選擇的時候我們就有些眼花繚亂了。雖然每個ELISA試劑盒價格都不貴，但是如果使用不恰當(dāng)?shù)脑?，造成檢測結(jié)果出差錯還是不好的。所以在使用ELISA檢測試劑盒做檢測的時候，步驟的準(zhǔn)確性真的是相當(dāng)重要的。以下先介紹一種簡單的—間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
如果按照以上的步驟用于ELISA檢測試劑盒檢測的話，那么不論購買的國產(chǎn)ELISA試劑盒還是進(jìn)口ELISA試劑盒的話，那么檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率都不低的。