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七夕前夕，ELISA試劑盒實驗為你節(jié)約時間和她約會吧！
發(fā)布時間： 2014-07-21 點擊次數(shù)： 1171次
ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
如何縮小ELISA實驗中的誤差呢？
要從自然因素（試劑穩(wěn)定性、準確率、儀器精密度）和人為因素（操作者）兩個方面入手：（1）檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
（2）使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
（3） 評估試劑的實用性。試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
（4）操作前仔細閱讀說明書。嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數(shù)的掌握等。
（5） 加樣要準確、快速。化學理論表明，生成物的量與反應(yīng)物的量成正相關(guān)。加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。
（6）洗滌*。洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
（7）嚴控反應(yīng)時間。反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
（8）嚴格掌握顯色時間。顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
（9）注意試劑保存期，過保存期的試劑不能使用。
結(jié)合以上幾點，使我們在為客戶測定試劑時大大提高了結(jié)果的真實度，及其快捷度，為顧客提供了方便，減少了實驗周期，想要實驗真實可靠，務(wù)必按照此實驗要素執(zhí)行，方可解決實驗中務(wù)必要的麻煩，為您節(jié)約時間。
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