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ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌？
發(fā)布時間： 2014-05-18 點擊次數(shù)： 1359次elisa試驗中洗滌是一個*的部分，因為洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比，每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留，在zui后一步產(chǎn)生信號。用戶可以通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結果。所以說洗滌是ELISA試劑盒實驗中*的部分，操作人員應該重視起來，不可馬虎大意。
ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌？
（1）浸泡式
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應液；
b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1～2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短；
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
e.重復操作c和d，洗滌3～4次（或按說明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結合，并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%～0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式
流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
ELISA試劑盒實驗中洗滌后為什么要靜置？
洗滌只是洗掉反應中的非特異性吸附，可采用靜置或者振蕩的方式，靜置是讓洗滌液充分洗掉未結合的酶標物或其他的物質(zhì).
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