大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶（pACCase）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿中大鼠磷酸化乙酰輔酶 A羧化酶（pACCase）  含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶（pACCase）  水平。
用純化的大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶（pACCase）  抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包
被單抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶（pACCase）  再與HRP標(biāo)記的大鼠磷
酸化乙酰輔酶 A羧化酶（pACCase）  抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化乙酰輔酶 A 羧化酶（pACCase）  呈正相關(guān)。用酶
標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠磷酸化乙酰輔酶
A羧化酶（pACCase）  濃度。 
試劑盒組成 
1  20 倍濃縮洗滌液  30ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（270ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張   
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標(biāo)本要求 
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，
濃度分別為 180ng/L，120ng/L  ，60ng/L，30ng/L， 15ng/L）。
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。   
4.  配液：將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。 
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
 
計算
   以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。 
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
檢測范圍：
10ng/L -200ng/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月