腎上腺皮質抗體（ACA）ELISA試劑盒實驗需求

發(fā)布時間： 2015/9/21　　點擊次數(shù)： 973次

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腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的器材
（1）聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，人ELISA試劑盒ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
（2）小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的試劑
（1）包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克加蒸餾水至1000ml
（2）洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
（3）稀釋液：牛血清白蛋白（BSA） 0.1克人ELISA試劑盒加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
（4）終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。
（5）底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克/L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。
（6） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5） 10ml 0.75%H2O2 32μl
（7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3%H2O2 2μl
（8）抗原、抗體和酶標記抗體。
（9）正常人血清和陽性對照血清。

腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒的包被：
包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據(jù)試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。

腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒的封閉：
封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點是價廉，可以高濃度使用（5%）。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復雜，而且封閉后的載體不易長期保存，因此在試劑盒的制備中較少應用。

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