服務熱線
021-54479081
021-54461587
-
ELISA試劑盒實驗原理分析管理
發(fā)布時間： 2015-03-24 點擊次數： 3139次Engvall 和Perlmann于1971年應用將酶附著于抗原或者抗體，通過化學反應的測定終產物顏色的方法進行了IgG的定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）"也就是我們所說的即酶聯(lián)免疫吸附試驗，這種固相酶免疫測定方法已經在科研領域得到了廣泛的應用。
ELISA檢測試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡單等優(yōu)點，但是在具體實驗過程中影響因素較多，并且要按照嚴格的說明要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時?？梢姷揭恍╁e誤結果（即假陽性或假陰性結果）。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。
（1）類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。ELISA檢測試劑盒解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig （s） 抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應物質
類AFP樣物質等，是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，也會出現假陽性結果。
（7）標本中其它成分的影響 血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，ELISA檢測試劑盒均對ELISA測定結果有干擾作用。