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芯片常見(jiàn)問(wèn)題分析
發(fā)布時(shí)間： 2010-06-30 點(diǎn)擊次數(shù)： 2536次1 芯片實(shí)驗(yàn)和定量PCR的優(yōu)劣比較?
基因表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)可以對(duì)大量基因一次性進(jìn)行定量研究,定量PCR則對(duì)大量基因需逐一進(jìn)行定量研究。
2 在芯片制作過(guò)程中的PCR原液是否可以為客戶保存?
可以抽干冷凍保存一年。
3 可否用DNA和芯片雜交?
不可以，因?yàn)樾酒系臉悠肥莄DNA而真核基因DNA中普遍存在內(nèi)顯子，核酸雜交無(wú)法順利進(jìn)行。
4 對(duì)于臨床癥狀不明顯的的遺傳病,如何取樣?
可以從病人抽取血樣或者骨髓。
5 如何保存血樣?
將血樣中血細(xì)胞分離出來(lái)，然后-80℃低溫保存。
6 脫落細(xì)胞是否都是死亡的細(xì)胞, 其中是否可以抽提mRNA?
不*是死亡的細(xì)胞, 但是mRNA的含量比較少, 建議用正常細(xì)胞抽提mRNA。
7 完成一張芯片的實(shí)驗(yàn),需要的細(xì)胞的量是多少?
需要5×106的細(xì)胞量
8 提供的電泳圖和OD值如何評(píng)價(jià)mRNA的質(zhì)量？
電泳圖可以分析mRNA和總RNA是否降解, OD值可以判斷純度。
9 是否可以將同一癥狀的病例混合后抽提,看共性表達(dá)?
可以。
10 芯片是否可以重復(fù)使用?
不可以。
11 雜交后的芯片如何保存?
避光常溫保存幾個(gè)星期。
12 在實(shí)驗(yàn)前期,如何定參照物?
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)確定使用共同參照物還是各自的參照物。
13 如何消除基因芯片實(shí)驗(yàn)中的個(gè)體差異？
可以使用同一樣品重復(fù)芯片實(shí)驗(yàn),取其共性,獲得可靠的數(shù)據(jù)結(jié)果。
14 芯片在雜交過(guò)程中為什么會(huì)發(fā)生非特異性雜交, 如何降低?
這是由于DNA堿基錯(cuò)配造成, 提高芯片雜交后洗脫液的溫度可以降低非特異性雜交。
15 芯片上基因cDNA是從什么組織中取得的?
芯片上基因cDNA來(lái)源于美國(guó)I.M.A.G.E.項(xiàng)目，是從人的各種組織中分離確定的，并且每個(gè)基因cDNA具有明確功能定義的，與其它基因不相重復(fù)的。
16 芯片上有多少條有效基因?
目前芯片上的有效基因數(shù)目zui多有7500條，每條基因都有明確的功能定義，不相重復(fù)。
17 基因表達(dá)譜芯片是如何進(jìn)行分類的?
基因表達(dá)譜芯片是根據(jù)芯片的用途來(lái)分類的，每種芯片上包括與特定用途相關(guān)的基因。
18表達(dá)譜芯片是否可以按照器官來(lái)進(jìn)行分類?
不可以。
19 基因芯片的假陽(yáng)性率是多少?
一般控制在1%---2%。
20 芯片制作中如何控制芯片的質(zhì)量
控制芯片的質(zhì)量主要要以下幾個(gè)方面, 玻片的選擇, 點(diǎn)樣的規(guī)范, 固定率, 芯片的背景,有效的避免融點(diǎn)等。
21 實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的熒光信號(hào)散點(diǎn)圖有何意義?
可以-直觀反映雜交后的差異表達(dá)與正常表達(dá)的比率, 顯示相關(guān)度和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞。
21 掃描背景不清楚會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生什么影響?
會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果混亂,而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗, 如果是雜質(zhì)污染等原因造成,可以通過(guò)洗片解決, 如果是mRNA不純,則需要重新抽提。
22 實(shí)驗(yàn)失敗有幾種原因?
mRNA的降解, MRNA的純度差, 反轉(zhuǎn)錄酶失敗, 標(biāo)記效率低, CY3容易見(jiàn)光降解。
23 得到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果后, 可以進(jìn)行那些研究的工作?
可以通過(guò)基因的差異表達(dá), 尋找目標(biāo)基因, 進(jìn)行聚類分析, 對(duì)差異基因進(jìn)行進(jìn)一步的功能研究。