人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒

試驗原理：
　　　　Caspase-3試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Caspase-3濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將Caspase-3和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Caspase-3的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒

操作注意事項
試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的Caspase-3標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的Caspase-3含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-40ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml
DTT 二硫蘇糖醇 [27565-41-9] 5g
DTT Solution （2M） DTT溶液（2M） / 1ml
Dulcitol 衛(wèi)茅醇 [608-66-2] 25g
Dulcitol 衛(wèi)茅醇 [608-66-2] 100g
E-64 [trans-Epoxysuccinyl-L-leucylamido-（4-guanidino） Butane] 蛋白酶抑制劑 （N-（反式-環(huán)氧丁二?；?L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺 [66701-25-5] 5mg
ECL Stain Kit ECL 染色試劑盒 / 5 preps
EDAC, hydrochloride 乙基 [3-（二甲胺基）丙基]碳二亞胺鹽酸鹽, 縮合劑 [25952-53-8] 25g
EDAC, hydrochloride 乙基 [3-（二甲胺基）丙基]碳二亞胺鹽酸鹽, 縮合劑 [25952-53-8] 100g
EDDAB 十二烷基二甲基乙基溴化銨 [68207-00-1] 5g
EDDAB 十二烷基二甲基乙基溴化銨 [68207-00-1] 25g
EDTA, free acid 乙二胺四乙酸 [60-00-4] 500g
EDTA, free acid 乙二胺四乙酸 [60-00-4] 500g
Escin 七葉皂素 [6805-41-0] 5g
Ethidium bromide 溴化乙錠 [1239-45-8] 1g
Ethidium bromide 溴化乙錠 [1239-45-8] 5g
EDTA, free acid 乙二胺四乙酸 [60-00-4] 100g
EDTA, free acid 乙二胺四乙酸 [60-00-4] 500g
EDTA copper, disodium salt 乙二胺四乙酸銅二鈉鹽 [39208-15-6] 250g
EDTA , dipotassium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鉀鹽二水 [25102-12-9] 250g
EDTA , dipotassium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鉀鹽二水 [25102-12-9] 100g
EDTA , dipotassium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鉀鹽二水 [25102-12-9] 500g
EDTA, disodium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鈉鹽二水 [6381-92-6] 500g
EDTA, disodium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鈉鹽二水 [6381-92-6] 500g
Eosin Y, sodium salt 曙紅Y水溶 [17372-87-1] 25g
Eosin Y, sodium salt 曙紅Y水溶 [17372-87-1] 100g
Ergosterol 麥角甾醇 [57-87-4] 5g
EDTA, disodium salt, dihydrate 乙二胺四乙酸二鈉鹽二水 [6381-92-6] 100g