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影響ELISA試劑盒靈敏度常出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法
發(fā)布時(shí)間： 2023-09-05 點(diǎn)擊次數(shù)： 1941次ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海研域生物將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)一下，以期給同行帶來(lái)—些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
1、超過(guò)有效期。試劑盒必須在有效期內(nèi)使用，超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)。
2、試劑盒沒(méi)有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響。
3、試劑、樣品用前未平衡至室溫
4、加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔。
5、洗板及加樣過(guò)程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力，
6、孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整。
7、洗板次數(shù)過(guò)多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗滌沖擊力太大，浸泡時(shí)間太長(zhǎng)等，
8、顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。
9、底物作用時(shí)間不夠，
10、燕餾水水質(zhì)有問(wèn)題
ELISA試劑盒靈敏度出現(xiàn)問(wèn)題相應(yīng)的解決方法
1、實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)試劑未過(guò)期,
2、不要將試劑盒長(zhǎng)時(shí)間置于常溫下，按便用規(guī)定儲(chǔ)藏。
3、試劑、樣品用前平衡至室溫
4、確定所使用的試劑體積正確，加入時(shí)間適當(dāng)。校正移液器，移液器與吸晚配合要緊密吻合。移液不宣太快，盡量排放完。
5、確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如愛(ài)氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗千凈，確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。
6、孵育溫度應(yīng)控制在37-38C，孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。保溫期內(nèi)不宜多開(kāi)門(mén)，以免影響保溫。
7、嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說(shuō)明書(shū)要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數(shù)，
8、顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過(guò)快，先加顯色劑A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合。
9、準(zhǔn)確定時(shí)。
10、測(cè)定燕餾水配制試劑對(duì)酶免疫法的影響。