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UElandy PCR 清潔試劑盒 分子生物學

更新時間:2025-08-27      點擊次數(shù):224
在分子生物學研究領域,PCR 技術(shù)作為核心工具,廣泛應用于基因擴增、疾病診斷、法醫(yī)鑒定等諸多方面。然而,PCR 反應結(jié)束后,產(chǎn)物中往往混雜著未反應的引物、dNTPs、酶以及鹽離子等雜質(zhì),這些雜質(zhì)會嚴重干擾后續(xù)實驗的準確性與可靠性,如在測序、克隆、酶切等實驗中,可能導致結(jié)果偏差甚至實驗失敗。因此,高效、精準地純化 PCR 產(chǎn)物成為分子生物學實驗流程中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。UElandy PCR 清潔試劑盒應運而生,憑借其的性能,為科研工作者提供了便捷、可靠的 PCR 產(chǎn)物純化解決方案。
一、技術(shù)原理
UElandy PCR 清潔試劑盒主要基于硅膠膜吸附技術(shù)。在 PCR 反應液中加入特定的結(jié)合緩沖液(Buffer PCR - A),其中含有的離液鹽成分可破壞核酸分子的水化層,使 DNA 雙鏈解旋并處于單鏈狀態(tài),同時降低溶液中各種分子的表面張力,促使 DNA 與硅膠膜發(fā)生特異性吸附。在合適的條件下,PCR 產(chǎn)物中的 DNA 片段能夠牢固地結(jié)合到硅膠膜上,而引物、dNTPs、酶以及鹽離子等雜質(zhì)則隨廢液被去除。經(jīng)過多次洗滌步驟,使用洗滌緩沖液(Buffer W2)進一步清除殘留雜質(zhì),最后通過低離子強度的洗脫緩沖液(Eluent)或無菌水,改變 DNA 與硅膠膜之間的相互作用力,使純化后的 DNA 從硅膠膜上洗脫下來,從而獲得高純度的 PCR 產(chǎn)物 。
二、產(chǎn)品組成與特點
(一)產(chǎn)品組成
  1. Buffer PCR - A:DNA 結(jié)合溶液,其配方能夠有效促使 PCR 產(chǎn)物中的 DNA 與硅膠膜結(jié)合,確保高效捕獲目標 DNA 片段。

  1. Buffer W2 concentrate:去鹽液,使用前需按試劑瓶上指定體積加入無水乙醇(可用無水乙醇或 95% 乙醇)進行稀釋。稀釋后的 Buffer W2 可有效去除結(jié)合在硅膠膜上的鹽分及其他小分子雜質(zhì),保證 DNA 的純度。

  1. Eluent:洗脫液,成分為 2.5 mM Tris - HCl,pH 8.5。該洗脫液能夠在不影響 DNA 穩(wěn)定性的前提下,溫和地將 DNA 從硅膠膜上洗脫下來,為后續(xù)實驗提供純凈的 DNA 樣本 。

(二)產(chǎn)品特點
  1. 高純度純化:通過優(yōu)化的硅膠膜吸附與洗滌流程,UElandy PCR 清潔試劑盒能夠高效去除 PCR 產(chǎn)物中的引物、dNTPs、酶以及鹽離子等雜質(zhì),使純化后的 DNA A260/A280 比值通常處于 1.7 - 1.9 之間,滿足各種對 DNA 純度要求的下游實驗需求,如高精度測序、復雜的克隆實驗等 。

  1. 高回收率:對于不同長度的 PCR 片段(涵蓋 50 bp - 20 kb 的廣泛范圍),該試劑盒均能實現(xiàn)高回收率,一般可達 70% - 95%。即使對于短至 50 bp 的小片段 DNA,也能保證較高的回收效率,減少珍貴樣本的損失,確保實驗數(shù)據(jù)的完整性和可靠性 。

  1. 操作便捷:試劑盒提供了負壓法和離心法兩種操作方式,用戶可根據(jù)自身實驗設備與操作習慣靈活選擇。無論是在配備負壓裝置的高通量實驗室,還是主要依靠離心機的常規(guī)實驗室,都能輕松完成 PCR 產(chǎn)物的純化工作。整個操作流程簡單明了,無需復雜的技術(shù)培訓,即可快速上手,顯著提高實驗效率 。

  1. 兼容性強:適用于多種 PCR 反應體系及不同來源的 PCR 產(chǎn)物,無論是常規(guī) PCR、巢式 PCR,還是實時熒光定量 PCR 產(chǎn)生的產(chǎn)物,都能進行有效的純化。同時,該試劑盒與后續(xù)多種分子生物學實驗技術(shù)高度兼容,純化后的 DNA 可直接用于限制性酶切、連接反應、分子雜交以及自動化熒光測序等實驗,為科研工作者構(gòu)建了順暢的實驗流程 。

  1. 高通量處理:采用 96 孔板形式的 DNA 制備板,特別適合高通量實驗需求。在大規(guī)模的基因篩查、臨床樣本檢測等實驗中,能夠同時處理大量樣本,大大縮短實驗時間,提高實驗通量,降低實驗成本 。

三、操作流程
(一)負壓法操作步驟
  1. 準備工作:正確連接負壓裝置,將 96 孔 DNA 制備板置于負壓裝置上。同時,確保 Buffer W2 concentrate 已按要求加入無水乙醇并混合均勻 。

  1. 結(jié)合反應:在 PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加入 3 倍體積的 Buffer PCR - A(若 Buffer PCR - A 不足 100 μl,則需加至 100 μl)。充分混合均勻后,將混合液轉(zhuǎn)移到 96 孔 DNA 制備板中。開啟負壓裝置,并調(diào)節(jié)負壓至 - 25 - 30 英寸汞柱,緩慢吸掉板中的溶液,使 DNA 牢固結(jié)合在硅膠膜上 。

  1. 洗滌步驟:向 96 孔 DNA 制備板中加入 0.3 ml Buffer W2,再次開啟負壓吸盡管中溶液。重復此洗滌步驟兩次,以去除雜質(zhì) 。

  1. 干燥處理:保持負壓狀態(tài),將 96 孔 DNA 制備板抽吸 10 min,盡量去除殘留液體。然后,將導流管朝下,將 96 孔 DNA 制備板在長纖維性紙巾上用力拍擊 6 次,進一步去除可能殘留的液體 。

  1. 洗脫 DNA:將 96 孔 DNA 制備板置于 96 孔 V 型底板上,在膜正中央加入 25 - 30 μl 水或 Eluent,室溫靜置 1 min,使洗脫液充分浸潤硅膠膜。隨后,以 3000 x g 離心 5 min,將純化后的 DNA 洗脫到 V 型底板中 。

(二)離心法操作步驟
  1. 結(jié)合反應:在 PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加入 3 倍體積的 Buffer PCR - A(若 Buffer PCR - A 不足 100 μl,則需加至 100 μl),充分混勻。將混合液轉(zhuǎn)移到 96 孔 DNA 制備板中,然后將 96 孔 DNA 制備板置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中,以 1000 x g 離心 1 min,棄去濾液,使 DNA 結(jié)合在硅膠膜上 。

  1. 洗滌步驟:向 96 孔 DNA 制備板中加入 0.3 ml Buffer W2,以 1000 x g 離心 1 min,棄去濾液。重復此洗滌步驟一次,確保雜質(zhì)被充分去除 。

  1. 干燥處理:將 96 孔 DNA 制備板再次置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中,以 3000 x g 離心 10 min,盡可能去除殘留液體 。

  1. 洗脫 DNA:將 96 孔 DNA 制備板置于潔凈的 96 孔 V 型底板中,在膜正中央加入 25 - 30 μl 水或 Eluent,室溫靜置 1 min。最后,以 3000 x g 離心 5 min,將純化后的 DNA 洗脫到 V 型底板中 。

注意事項:在操作過程中,應嚴格按照試劑盒說明書進行試劑的添加與操作條件的控制。例如,Buffer W2 concentrate 在使用前必須準確加入無水乙醇;洗脫時,若將洗脫液或水加熱至 65℃,有利于提高洗脫效率;由于 DNA 分子呈酸性,建議將純化后的 DNA 保存在 2.5 mM Tris - HCl,pH 8.5 的洗脫液中,以維持 DNA 的穩(wěn)定性 。
四、應用案例
(一)基因測序
在二代基因測序?qū)嶒炛?,PCR 擴增是獲取足夠量目標 DNA 片段的常用手段。然而,擴增產(chǎn)物中的雜質(zhì)會嚴重影響測序的準確性和讀長。使用 UElandy PCR 清潔試劑盒對 PCR 產(chǎn)物進行純化后,可有效去除引物二聚體、未反應的 dNTPs 等雜質(zhì),為測序反應提供高純度的 DNA 模板。經(jīng)實際應用驗證,使用該試劑盒純化后的 PCR 產(chǎn)物進行測序,測序峰圖清晰,背景噪音低,讀長顯著提高,能夠準確解讀基因序列信息,為基因功能研究、遺傳疾病診斷等提供可靠的數(shù)據(jù)支持 。
(二)分子克隆
在構(gòu)建重組質(zhì)粒的分子克隆實驗中,需要將 PCR 擴增得到的目的基因片段與載體進行連接。PCR 產(chǎn)物中的雜質(zhì)可能會干擾連接反應的效率,導致重組質(zhì)粒構(gòu)建失敗。利用 UElandy PCR 清潔試劑盒對 PCR 產(chǎn)物進行純化,可確保目的基因片段的高純度。純化后的基因片段與載體連接效率大幅提升,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,陽性克隆率顯著增加。通過對陽性克隆的篩選與鑒定,成功構(gòu)建了多種重組質(zhì)粒,為后續(xù)基因表達、蛋白質(zhì)功能研究等實驗奠定了堅實基礎 。
(三)SNP 分析
單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析在遺傳學研究、藥物基因組學等領域具有重要意義。在基于 PCR 技術(shù)的 SNP 分析實驗中,PCR 產(chǎn)物的純度直接影響 SNP 位點的準確識別。UElandy PCR 清潔試劑盒能夠高效去除 PCR 產(chǎn)物中的雜質(zhì),保證 SNP 分析結(jié)果的可靠性。在對大量樣本進行 SNP 分析時,該試劑盒的高通量處理能力得以充分發(fā)揮,可同時對 96 個樣本進行 PCR 產(chǎn)物純化,大大提高了分析效率,為大規(guī)模遺傳關(guān)聯(lián)研究提供了有力工具 。
五、市場競爭優(yōu)勢
在 PCR 清潔試劑盒市場中,競爭激烈,眾多品牌紛紛推出各自的產(chǎn)品。然而,UElandy PCR 清潔試劑盒憑借其優(yōu)勢脫穎而出。與部分競爭對手產(chǎn)品相比,UElandy 試劑盒在純度和回收率方面表現(xiàn)更為出色。一些同類產(chǎn)品在去除雜質(zhì)時可能會導致 DNA 的部分損失,使得回收率較低,且難以有效去除引物二聚體等頑固雜質(zhì),影響后續(xù)實驗。而 UElandy PCR 清潔試劑盒通過優(yōu)化的硅膠膜吸附與洗滌體系,在保證高回收率的同時,實現(xiàn)了更高水平的雜質(zhì)去除,為用戶提供了質(zhì)量更優(yōu)的純化 DNA 樣本 。
在操作便捷性上,UElandy 提供的負壓法和離心法兩種操作方式,相比某些僅支持單一操作方式的試劑盒,更能滿足不同實驗室的設備條件和用戶操作習慣。對于高通量需求的用戶,其 96 孔板設計以及高效的操作流程,能夠顯著提高實驗通量,降低時間成本。此外,UElandy 作為品牌,背后有專業(yè)的研發(fā)與技術(shù)支持團隊,能夠及時響應用戶在使用過程中遇到的問題,為用戶提供的技術(shù)指導與售后服務,這也是其在市場競爭中的一大優(yōu)勢 。
UElandy PCR 清潔試劑盒以其先進的技術(shù)原理、的產(chǎn)品性能、便捷的操作流程以及廣泛的應用范圍,成為分子生物學研究中的重要工具。無論是在科研院校的基礎研究,還是在生物技術(shù)企業(yè)的產(chǎn)品研發(fā)、臨床診斷機構(gòu)的樣本檢測等領域,都能為用戶提供高效、可靠的 PCR 產(chǎn)物純化解決方案,助力科研工作者突破實驗瓶頸,推動生命科學研究不斷向前發(fā)展 。



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