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細(xì)胞培養(yǎng)長(zhǎng)期研究中,TrypLE Express酶的使用注意事項(xiàng)有哪些?

更新時(shí)間:2025-08-16      點(diǎn)擊次數(shù):302
在細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)中,細(xì)胞類型的差異致使細(xì)胞的生長(zhǎng)特性、表面結(jié)構(gòu)、對(duì)外部環(huán)境的耐受性等方面存在不同,這使得 TrypLE Express 酶在作用于不同細(xì)胞時(shí),效果會(huì)出現(xiàn)明顯區(qū)別。


  1. 細(xì)胞系

    • 貼壁細(xì)胞系:像中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人胚腎 293 細(xì)胞(HEK 293)這類常見的貼壁細(xì)胞系,通常貼壁較為緊密。TrypLE Express 酶能夠特異性地裂解賴氨酸和精氨酸 C - 末端的肽鍵,有效解離細(xì)胞與培養(yǎng)皿表面的連接。在長(zhǎng)期培養(yǎng)中,該酶溫和的作用特性不會(huì)對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物造成明顯破壞,例如多次傳代后,HEK 293 細(xì)胞表面的相關(guān)抗原標(biāo)志物表達(dá)依然穩(wěn)定,細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)速率也能保持相對(duì)穩(wěn)定,保證了實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性和結(jié)果的可靠性。不過(guò),由于不同貼壁細(xì)胞系貼壁強(qiáng)度存在差異,在使用 TrypLE Express 酶時(shí),需要針對(duì)具體細(xì)胞系摸索合適的作用時(shí)間和濃度,以達(dá)到最佳解離效果 。

    • 懸浮細(xì)胞系:對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞系,如 Jurkat 細(xì)胞,雖然不存在貼壁解離的問(wèn)題,但在細(xì)胞傳代、分選等操作中也會(huì)用到 TrypLE Express 酶。研究表明,相較于傳統(tǒng)胰蛋白酶,TrypLE Express 酶處理 Jurkat 細(xì)胞后,細(xì)胞表面 CD2 等標(biāo)志物無(wú)明顯損失,細(xì)胞活力和功能得以較好維持。在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中,能夠減少對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的影響,使細(xì)胞保持良好的增殖狀態(tài),為后續(xù)的細(xì)胞功能研究、藥物篩選等實(shí)驗(yàn)提供穩(wěn)定的細(xì)胞來(lái)源 。

  2. 原代細(xì)胞

    • 原代人角質(zhì)化細(xì)胞:原代細(xì)胞對(duì)外部環(huán)境變化較為敏感,TrypLE Express 酶非動(dòng)物源性的特點(diǎn)為其提供了更安全的解離環(huán)境,避免了傳統(tǒng)動(dòng)物源性酶可能引入的病原體風(fēng)險(xiǎn)。在原代人角質(zhì)化細(xì)胞的長(zhǎng)期培養(yǎng)中,使用該酶能夠在保證細(xì)胞解離效果的同時(shí),減少對(duì)細(xì)胞的損傷,維持細(xì)胞的正常生理功能。細(xì)胞可以保持良好的分化特性,細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu)和細(xì)胞表面的特異性蛋白表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,有助于深入研究角質(zhì)化細(xì)胞的生物學(xué)特性和相關(guān)疾病機(jī)制 。

    • 原代神經(jīng)元細(xì)胞:神經(jīng)元細(xì)胞較為脆弱,對(duì)酶的作用更為敏感。TrypLE Express 酶成分均一、純度高的特性,使其在解離原代神經(jīng)元細(xì)胞時(shí),能將對(duì)細(xì)胞的損害降到。在長(zhǎng)期培養(yǎng)中,可較好地保留神經(jīng)元細(xì)胞的突觸結(jié)構(gòu)和電生理特性,細(xì)胞的存活時(shí)間和功能維持時(shí)間顯著延長(zhǎng),為神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究、神經(jīng)再生研究等提供了更優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞模型 。

  3. 干細(xì)胞

    • 胚胎干細(xì)胞:胚胎干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能,在其長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中,對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的維持要求。TrypLE Express 酶溫和的作用方式不會(huì)影響胚胎干細(xì)胞的這些特性,多次傳代后,細(xì)胞依然能夠保持較高的干性,細(xì)胞表面的干性標(biāo)志物如 Oct4、Sox2 等表達(dá)穩(wěn)定。這使得科研人員能夠利用該酶進(jìn)行胚胎干細(xì)胞的傳代、擴(kuò)增和誘導(dǎo)分化等操作,為干細(xì)胞治療、發(fā)育生物學(xué)研究等領(lǐng)域提供可靠的細(xì)胞資源 。

    • 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs):iPSCs 同樣需要在培養(yǎng)過(guò)程中維持良好的細(xì)胞狀態(tài)。TrypLE Express 酶在 iPSCs 的長(zhǎng)期培養(yǎng)中,既能實(shí)現(xiàn)高效的細(xì)胞解離,又不會(huì)對(duì)細(xì)胞的重編程狀態(tài)和分化能力產(chǎn)生明顯影響。細(xì)胞可以穩(wěn)定地進(jìn)行傳代,且在誘導(dǎo)分化為不同細(xì)胞類型時(shí),能夠保持正常的分化潛能和效率,有助于推動(dòng) iPSCs 在疾病建模、藥物研發(fā)等方面的應(yīng)用 。



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