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低細胞毒性：由于其無法穿透細胞膜進入活細胞，SafeGreen 對細胞的毒性顯著降低 。以 HeLa 細胞實驗為例，將 HeLa 細胞分別與 1X SYBR Safe、SafeGreen 和 SafeRed 孵育 30 分鐘后發(fā)現(xiàn)，SYBR Safe 可迅速進入細胞并對細胞核染色，而 SafeGreen 和 SafeRed 無法穿透細胞膜與活細胞內(nèi)的 DNA 結(jié)合 。這表明 SafeGreen 在實驗過程中不會對細胞的生理狀態(tài)產(chǎn)生明顯影響，為細胞水平的核酸研究提供了安全保障。
低致突變性：多項研究表明，SafeGreen 在致突變性測試中表現(xiàn)優(yōu)異。與具有強致突變性的 EB 不同，SafeGreen 不會誘導(dǎo)敘利亞地鼠胚胎（SHE）細胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，也不會在人外周血淋巴細胞培養(yǎng)物中誘導(dǎo)染色體畸變 。在標準 Ames 測試中，與 EB 相比，SafeGreen 在幾種不同的 Salmonella typhimurium 菌株中的致突變效應(yīng)更低，為科研人員的長期使用減少了健康隱患 。
清晰條帶顯示：SafeGreen 對核酸具有高度敏感性，能夠清晰地顯示核酸條帶。在瓊脂糖凝膠電泳實驗中，無論是低濃度還是高濃度的核酸樣品，使用 SafeGreen 染色后，均可獲得條帶分離效果良好的凝膠圖像 。其靈敏度足以檢測到極微量的核酸，可與傳統(tǒng)高靈敏度染料相媲美，滿足如 PCR 產(chǎn)物鑒定、克隆與載體構(gòu)建等實驗中對核酸條帶精確觀察的需求 。
精準定量基礎(chǔ)：憑借其與核酸結(jié)合后顯著的熒光變化，SafeGreen 為核酸定量分析提供了可靠基礎(chǔ)。在核酸定量實驗中，熒光強度與核酸濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，科研人員可通過檢測熒光強度，借助標準曲線精準推算核酸樣品的濃度，確保定量結(jié)果的準確性 。
化學(xué)穩(wěn)定性：SafeGreen 在常見的實驗條件下表現(xiàn)出出色的化學(xué)穩(wěn)定性。它與 TAE、TBE、RRB 等常用電泳緩沖溶液具有良好的兼容性 ，在不同緩沖體系中均能保持穩(wěn)定的染色性能，不會因緩沖液成分的差異而發(fā)生分解或失效。此外，SafeGreen 對溫度、pH 值等環(huán)境因素的變化具有一定耐受性，即使在實驗操作過程中出現(xiàn)輕微的條件波動，也能維持穩(wěn)定的染色效果 。
熒光穩(wěn)定性：該染料的熒光信號在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定，不易發(fā)生淬滅現(xiàn)象。在凝膠成像過程中，即使長時間曝光，SafeGreen 標記的核酸條帶熒光強度也不會明顯減弱，保證了實驗結(jié)果記錄的準確性和可重復(fù)性 。這一特性使得科研人員在進行多次成像分析或長時間實驗觀察時，無需擔心熒光信號衰減對結(jié)果造成的干擾 。
無條帶扭曲現(xiàn)象：SafeGreen 分子結(jié)構(gòu)使其在采用膠染法進行染色時，不會影響 DNA 條帶的遷移。與其他一些無毒核酸染料不同，即使在高濃度核酸樣品條件下，使用 SafeGreen 染色也不會出現(xiàn)因分子量大造成的前染條帶扭曲現(xiàn)象（即 “笑臉" 現(xiàn)象） 。這使得科研人員能夠準確判斷核酸片段的分子量和遷移率，為核酸電泳結(jié)果的分析提供了可靠依據(jù) 。
多激發(fā)光源適用性：SafeGreen 可在 488nm 波長下被藍光激發(fā)，適用于藍光切膠儀或掃描儀直接觀察，有效避免了傳統(tǒng)紫外激發(fā)對核酸和實驗人員的潛在損傷 。同時，它也可被紫外激發(fā)，用于常規(guī)的紫外凝膠成像系統(tǒng)，為不同實驗室設(shè)備配置提供了靈活的選擇，滿足多樣化的實驗需求 。
膠染法操作步驟：在制備瓊脂糖凝膠時，將適量的 SafeGreen 核酸染料加入到熔化且冷卻至 50 - 60℃的瓊脂糖溶液中 。例如，每 50 mL 瓊脂糖溶液中可加入 5 μL 10,000× 濃度的 SafeGreen 染料儲液，充分混勻后倒入制膠模具中。待凝膠凝固后，將其放入電泳槽，加入適量電泳緩沖液（如 TAE 或 TBE 緩沖液），使其覆蓋凝膠表面 。將 DNA 樣品與上樣緩沖液混合后，用移液器小心地將樣品加入凝膠的加樣孔中，避免產(chǎn)生氣泡 。接通電源，根據(jù)核酸片段大小設(shè)置合適的電壓和電泳時間，一般電壓為 100 - 150V，時間為 30 - 60 分鐘不等 。電泳結(jié)束后，可使用藍光切膠儀或紫外凝膠成像系統(tǒng)對凝膠進行觀察和拍照，此時可清晰看到被 SafeGreen 染色的核酸條帶 。
泡染法操作步驟：先進行常規(guī)的核酸電泳實驗，將 DNA 樣品在未添加染料的瓊脂糖凝膠中進行電泳分離 。電泳結(jié)束后，將凝膠小心取出，放入含有 SafeGreen 染色液的容器中 。染色液可通過將 10 μL 10,000× 濃度的 SafeGreen 染料加入到 100 ml 1×TAE 或 0.5×TBE 緩沖液中配制而成 。確保凝膠浸沒在染色液中，在室溫下輕輕振蕩孵育 30 - 60 分鐘 。染色時間可根據(jù)凝膠厚度、瓊脂糖濃度以及核酸片段大小適當調(diào)整，凝膠越厚、瓊脂糖濃度越高或核酸片段越大，所需染色時間越長 。孵育結(jié)束后，直接使用藍光切膠儀或紫外凝膠成像系統(tǒng)對凝膠進行觀察，無需額外的脫色步驟，即可觀察到清晰的核酸條帶 。
PCR 產(chǎn)物檢測：在 PCR 反應(yīng)體系中，可在反應(yīng)結(jié)束后直接加入適量 SafeGreen 染料 。將 PCR 產(chǎn)物與染料充分混合，然后取適量混合液點樣到瓊脂糖凝膠上進行電泳分析 。通過觀察凝膠上條帶的有無和亮度，可判斷 PCR 反應(yīng)是否成功以及產(chǎn)物的相對含量 。
核酸文庫質(zhì)量控制：對于構(gòu)建的核酸文庫，如 DNA 文庫或 RNA 文庫，可使用 SafeGreen 對文庫中的核酸進行染色檢測 。通過電泳分析染色后的核酸條帶分布情況，評估文庫的質(zhì)量，包括核酸片段的大小分布、濃度以及是否存在雜質(zhì)等 。在文庫篩選和后續(xù)實驗應(yīng)用前，確保文庫的質(zhì)量符合要求 。
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