核心技術：Ni - NTA Superflow 的核心技術基于鎳離子（Ni2?）與帶有多聚組氨酸標簽（His - Tag）的蛋白質之間的特異性親和作用。該產品中的 Ni - NTA（次氮基三乙酸鎳）配體通過共價鍵結合到高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠介質上，形成穩(wěn)定且高效的親和吸附位點。這種的設計使得它能夠特異性地識別并結合含有 His - Tag 的重組蛋白，實現(xiàn)從復雜的生物樣品中精準分離目標蛋白。

規(guī)格優(yōu)勢：500 ml 的大容量包裝，適用于中大規(guī)模的蛋白純化實驗需求。無論是在科研機構進行的頻繁蛋白純化項目，還是生物技術公司的小試、中試生產階段，該規(guī)格都能在保證實驗連貫性的同時，降低單位成本，提高實驗效率，減少因頻繁更換小包裝試劑帶來的操作誤差與時間浪費。

結合過程：當含有 His - Tag 蛋白的樣品溶液通過填充有 Ni - NTA Superflow 介質的層析柱時，His - Tag 中的組氨酸殘基會與介質表面的 Ni2?離子發(fā)生配位作用，形成穩(wěn)定的絡合物。在生理條件下，這種相互作用具有高度的特異性和親和力，能夠有效地將目標蛋白從其他雜質蛋白中分離出來。而樣品中的其他無 His - Tag 的蛋白質則不會與介質結合，直接流穿層析柱。

洗脫過程：結合在介質上的 His - Tag 蛋白可通過改變洗脫緩沖液的條件進行洗脫。常用的方法是在洗脫緩沖液中加入咪唑，咪唑與 Ni2?離子具有相似的配位能力，能夠競爭性地結合到 Ni - NTA 配體上，從而將 His - Tag 蛋白從介質上置換下來。通過逐步增加洗脫緩沖液中咪唑的濃度，可以實現(xiàn)對不同親和力的 His - Tag 蛋白的分步洗脫，提高蛋白純化的分辨率。

高載量與高流速：Ni - NTA Superflow 介質具有出色的物理性能，其載量高達 20mg/ml ，相比一些傳統(tǒng)的 Ni - NTA 瓊脂糖介質（載量約 10mg/ml），能夠處理更多量的目標蛋白，大大提高了單次純化實驗的效率。同時，該介質可以耐受更高的壓力（最高可達 140psi，即 10bar），允許更快的流速，最大流速可達 20ml/min 。這種高流速特性使得在保證純化效果的前提下，能夠顯著縮短蛋白純化所需的時間，尤其適用于對實驗進度要求較高的項目。

廣泛的兼容性：該產品能夠耐受多種實驗條件，無論是在天然條件下進行蛋白質的純化，以保持其生物活性和天然構象；還是在變性條件下，如使用 8M 尿素或 6M 鹽酸胍等變性劑，用于純化那些在天然狀態(tài)下難以溶解或易聚集的蛋白質，Ni - NTA Superflow 都能發(fā)揮良好的作用。此外，它還可以耐受一定濃度的還原劑，如 20mM 的巰基乙醇或者 10mM 的 DTT，這對于一些含有二硫鍵、需要在還原環(huán)境下保持活性的蛋白質純化尤為重要，拓寬了其在不同類型蛋白純化實驗中的應用范圍。

簡便的操作與良好的重復性：使用 Ni - NTA Superflow 進行蛋白純化的操作相對簡便，只需將澄清的細菌裂解物等樣品直接上柱，經過簡單的洗滌和洗脫步驟，即可一步純化出帶有 His - Tag 的融合蛋白。對于預裝柱形式的 Ni - NTA Superflow 產品，更是省掉了自裝柱子的繁瑣過程，避免了因裝柱不當導致的氣泡、裂縫、干柱等問題，確保每次實驗結果的穩(wěn)定性和重復性。同時，優(yōu)化后的 Ni - NTA Superflow 預裝柱再生非常方便，僅需用 NaOH 溶液流過處理 30 分鐘即可再次使用，大大降低了實驗成本。

準備工作：根據(jù)實驗需求選擇合適的層析柱，若使用 500 ml 的 Ni - NTA Superflow 散裝填料，則需進行裝柱操作，確保柱子裝填均勻、無氣泡。用適量的平衡緩沖液（通常為含有一定濃度鹽離子和緩沖劑的溶液，如 pH 7.4 的 PBS 緩沖液）對柱子進行平衡，直至流出液的 pH 值和電導率與平衡緩沖液一致。同時，準備好待純化的含有 His - Tag 蛋白的樣品，確保樣品澄清，可通過離心或過濾等方式去除雜質顆粒。

上樣與結合：將準備好的樣品緩慢加入到平衡后的層析柱中，控制流速，使樣品能夠充分與 Ni - NTA Superflow 介質接觸，目標 His - Tag 蛋白與介質上的 Ni2?離子發(fā)生特異性結合。在此過程中，可通過監(jiān)測流出液的紫外吸收值（通常在 280nm 波長處）來判斷蛋白結合情況，當流出液的紫外吸收值恢復到基線水平時，表明樣品上樣完成。

洗滌：用洗滌緩沖液（一般為含有較低濃度咪唑的平衡緩沖液）對柱子進行洗滌，去除未結合的雜質蛋白以及與介質結合較弱的非特異性物質。洗滌過程中持續(xù)監(jiān)測流出液的紫外吸收值，直至吸收值穩(wěn)定在較低水平，說明洗滌充分。

洗脫：更換為含有較高濃度咪唑的洗脫緩沖液，按照設定的流速進行洗脫，His - Tag 蛋白會被逐步洗脫下來。收集洗脫液，可通過 SDS - PAGE 電泳等方法對洗脫峰中的蛋白進行檢測，確定目標蛋白所在的洗脫組分。

日常維護：在每次使用后，應及時對層析柱進行清洗。先用去離子水沖洗柱子，去除殘留的緩沖液和鹽離子，然后用含有一定濃度 NaOH 的溶液進行清洗，以去除可能殘留的蛋白質和微生物污染。對于預裝柱，按照產品說明書進行再生處理，確保柱子的性能能夠得到有效恢復。

儲存條件：Ni - NTA Superflow 應儲存于 2 - 8°C 的環(huán)境中，避免陽光直射。若為散裝填料，在儲存時應確保其始終處于含有防腐劑（如 0.02% 的緩沖液中，防止微生物生長。對于預裝柱，應保持其包裝密封完好，防止柱子干燥，影響其性能。

科研機構的基礎研究：在某高校的生物化學實驗室中，研究人員利用 Ni - NTA Superflow (500 ml) 對新發(fā)現(xiàn)的一種具有潛在抗腫瘤活性的 His - Tag 融合蛋白進行純化。通過優(yōu)化上樣、洗滌和洗脫條件，成功獲得了高純度的目標蛋白，純度經檢測達到 95% 以上。后續(xù)利用該純化后的蛋白進行的結構解析和功能驗證實驗，為深入研究該蛋白的作用機制奠定了堅實基礎。

生物技術公司的產品研發(fā)：一家專注于生物制藥的公司，在研發(fā)一款基于重組蛋白的新型藥物時，使用 Ni - NTA Superflow 進行大規(guī)模的蛋白純化工藝開發(fā)。憑借其高載量和高流速的優(yōu)勢，在保證產品質量的前提下，大幅提高了生產效率，降低了生產成本，加速了產品從研發(fā)到臨床前試驗的進程 。