Illumina MS-102-2003 基因測序試劑用戶指南

——高效、精準(zhǔn)的下一代測序解決方案

一、產(chǎn)品概述

Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）（貨號：MS-102-2003）是一款專為Illumina MiSeq測序平臺設(shè)計的高通量基因測序試劑盒，采用邊合成邊測序（SBS）技術(shù)，支持長達(dá)500個循環(huán)的測序反應(yīng)，單次運行可生成高達(dá)8.5 Gb的數(shù)據(jù)輸出，適用于全基因組重測序、轉(zhuǎn)錄組分析、宏基因組學(xué)及靶向測序等應(yīng)用場景。

核心參數(shù)：

• 規(guī)格：500 cycles

• 數(shù)據(jù)輸出：8.5 Gb（500 cycles）、5.1 Gb（300 cycles）、1.2 Gb（300 cycles Micro Kit）、0.850 Gb（50 cycles）

• 讀長：雙端測序（Paired-End）支持2×250 bp（標(biāo)準(zhǔn)配置），最長可擴展至2×300 bp

• 試劑類型：簇生成、雙端測序、邊合成邊測序

• 系統(tǒng)兼容性：研究模式下的MiSeqDx、MiSeq FGx及標(biāo)準(zhǔn)MiSeq系統(tǒng)

• 儲存條件：-20℃避光保存，解凍后避免反復(fù)凍融

二、技術(shù)優(yōu)勢

1. 高通量與長讀長

• 雙表面成像技術(shù)：與v1試劑盒相比，雙表面成像使每個流動槽的通量翻倍，片段數(shù)增加2倍。

• 長讀長支持：500 cycles試劑盒可擴展片段長度，適用于復(fù)雜基因組區(qū)域解析（如結(jié)構(gòu)變異檢測）。

2. 高效化學(xué)過程

• 改良的簇密度：通過優(yōu)化化學(xué)配方，簇密度提升30%，減少循環(huán)時間。

• 高質(zhì)量測序：Q30得分（質(zhì)量值≥30的堿基比例）≥80%，確保堿基識別準(zhǔn)確性。

3. 靈活配置

• 多規(guī)格選擇：提供50、300、500 cycles三種循環(huán)數(shù)規(guī)格，滿足不同實驗需求。

• Micro/Nano規(guī)格：適用于低通量應(yīng)用（如Micro Kit：1.2 Gb/300 cycles；Nano Kit：0.5 Gb/500 cycles）。

4. 智能交互與兼容性

• RFID編碼：所有組件均采用RFID編碼，與MiSeq系統(tǒng)智能交互，驗證兼容性并減少操作誤差。

• 廣泛適配：兼容研究模式下的多種MiSeq系統(tǒng)，支持Illumina Advantage大規(guī)模測序產(chǎn)品（如特定批次出貨、延長保質(zhì)期）。

三、操作指南

（一）實驗前準(zhǔn)備

1. 試劑與耗材

• Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）

• MiSeq測序儀及配套流動槽

• 文庫構(gòu)建試劑（如TruePrep RNA Library Prep Kit for Illumina）

• Qubit定量儀、NaOH變性試劑、冰水混合物（冰:水=3:1）

2. 文庫準(zhǔn)備

• 使用文庫構(gòu)建試劑生成測序文庫，并通過Qubit定量儀確定濃度。

• 將文庫稀釋至4 nM，用NaOH變性后，與預(yù)冷的雜交緩沖液（HT1）混合至20 pM終濃度。

• 添加5%比例的PhiX質(zhì)控DNA以監(jiān)控測序質(zhì)量。

（二）實驗操作

1. 試劑盒準(zhǔn)備

• 從-20℃冰箱取出試劑盒，室溫解凍后顛倒混勻。

• 準(zhǔn)備冰水混合物預(yù)冷雜交緩沖液（HT1）。

2. 上機操作

• 啟動MiSeq測序儀，選擇“Sequence"模式并加載試劑盒。

• 創(chuàng)建Sample Sheet文件，定義樣本信息及運行參數(shù)（如讀長、循環(huán)數(shù)）。

• 建議初始上機濃度為4 pM，后續(xù)可根據(jù)結(jié)果調(diào)整至8 pM。

3. 測序運行

• 單次運行時間：約27-48小時（具體時間取決于讀長和循環(huán)數(shù)）。

• 運行結(jié)束后，系統(tǒng)自動生成FASTQ格式數(shù)據(jù)文件。

（三）實驗后處理

• 數(shù)據(jù)分析：推薦使用Illumina BaseSpace平臺或第三方工具（如BWA、GATK）進行數(shù)據(jù)處理。

• 試劑盒儲存：未使用的試劑需重新密封，-20℃保存。

• 廢棄物處理：按實驗室生物安全規(guī)范處理。

四、使用技巧與高效操作

1. 優(yōu)化文庫質(zhì)量

• 確保文庫片段分布均勻，避免小片段（<100 bp）過量導(dǎo)致測序失敗。

• 使用Agilent Bioanalyzer或TapeStation驗證文庫質(zhì)量。

2. 提高測序通量

• 結(jié)合雙表面成像技術(shù)，選擇500 cycles試劑盒以每個流動槽的通量。

• 對于低通量需求，可選擇Micro或Nano規(guī)格試劑盒。

3. 質(zhì)量控制

• 運行前檢查儀器狀態(tài)，避免硬件故障導(dǎo)致數(shù)據(jù)丟失。

• 監(jiān)控Q30得分和覆蓋度（目標(biāo)區(qū)域測序深度需≥30×）。

五、注意事項

1. 安全規(guī)范

• 操作時佩戴手套與護目鏡，避免試劑接觸皮膚或吸入。

• 廢棄物需按化學(xué)危險品處理。

2. 操作細(xì)節(jié)

• 移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液器，誤差<±1%。

• 溫度控制：確保試劑和文庫在規(guī)定溫度下儲存和處理。

3. 故障排除

• 簇密度過高：降低上機濃度至4 pM以下。

• 信號飽和：檢查文庫濃度和流動槽狀態(tài)。

六、用戶評價與支持

• 用戶反饋：

• “MS-102-2003試劑盒顯著提高了測序通量，雙表面成像技術(shù)使數(shù)據(jù)輸出翻倍。"

• “Q30得分穩(wěn)定在85%以上，適用于高精度變異檢測。"